Inhoud
Polymerase-kettingreactie (PCR) -analyse is een laboratoriumtechniek. Het doel van PCR-testen is om kleine hoeveelheden DNA in een monster te vinden, met behulp van een proces dat bekend staat als versterking. Tijdens PCR-amplificatie wordt het van belang zijnde DNA herhaaldelijk gekopieerd totdat er genoeg van is voor analyse en detectie. PCR kan bijvoorbeeld worden gebruikt om kleine hoeveelheden DNA te identificeren van de organismen die gonorroe of chlamydia veroorzaken die aanwezig zijn in een urinemonster.Hoe werkt PCR?
De eerste stap van PCR is om te creëren primers. Dit zijn korte DNA-sequenties die overeenkomen met de uiteinden van het DNA-monster dat u probeert te detecteren. Ze zijn de truc om een bepaald stukje DNA te vinden, te versterken en te detecteren. Dat stukje DNA kan worden gebruikt om een ziekteverwekker te identificeren. Het kan ook worden gebruikt om dingen te doen zoals het detecteren van genen voor antibioticaresistentie.
Als u eenmaal uw primers heeft, is de volgende stap in PCR het verwarmen van het monster zodat het dubbelstrengs DNA zich in twee enkele strengen scheidt - dit wordt denaturatie. Dan de primersworden gecombineerd met het monster-DNA. Hierna een DNA polymerase wordt gebruikt om DNA-replicatie op de primerlocatie te starten. Ten slotte wordt het DNA verwarmd om de strengen opnieuw te scheiden. Daarmee begint het hele PCR-proces opnieuw.
De hoeveelheid van het van belang zijnde DNA-segment dat in het monster aanwezig is, neemt exponentieel toe met elke PCR-cyclus. In de eerste cyclus wordt één exemplaar twee. Dan worden twee exemplaren vier, dan acht, enz. Deze exponentiële groei betekent dat er in het algemeen slechts 20 tot 40 cycli nodig zijn om te bepalen of het betreffende DNA aanwezig is. (Als het DNA aanwezig is, zijn 20-40 cycli ook voldoende om een voldoende monster voor analyse te leveren).
Alle stappen van een polymerasekettingreactie - het DNA denatureren, de primers aanbrengen en het DNA verlengen - gebeuren bij verschillende temperaturen. Dat betekent dat nadat het eerste mengsel is samengesteld, de stappen kunnen worden gecontroleerd via een proces dat bekend staat als thermocycling. Thermocycling betekent dat de temperatuur net lang genoeg op het noodzakelijke niveau wordt gehouden om elke stap te laten plaatsvinden. PCR is dus een efficiënte manier om de hoeveelheid doel-DNA te versterken. In feite kan het worden bereikt in een enkele reageerbuis met weinig menselijke tussenkomst.
Polymerase-kettingreactie vertegenwoordigde een revolutie in de biologische techniek toen deze voor het eerst werd ontwikkeld in de vroege jaren tachtig. De bedenker van PCR, Kary Mullis, won in 1993 de Nobelprijs voor scheikunde voor zijn werk.
Waarom PCR relevant is voor SOA-testen
Polymerase-kettingreactie en gerelateerde technieken zoals ligase kettingreactie, blijken van toenemend belang te zijn voor SOA-testen, omdat deze technieken direct kleine hoeveelheden viraal DNA of RNA in monsters kunnen identificeren. Het identificeren van de genetische code van een ziekteverwekker vereist niet dat de ziekteverwekker in leven is, in tegenstelling tot een bacteriecultuur of virale cultuur. Het vereist ook niet dat de infectie lang genoeg geleden heeft plaatsgevonden om mensen een detecteerbare antilichaamreactie te laten ontwikkelen (de manier waarop infecties worden gedetecteerd door ELISA). Dit betekent dat PCR-technieken ziekten soms eerder kunnen detecteren dan andere tests. Sterker nog, SOA's kunnen worden opgespoord zonder dat u zich zoveel zorgen hoeft te maken over het levend houden of testen van monsters op precies het juiste moment.
De beste soa-tests voor thuis